폴리펩티드의 용해
각 아미노산은 고유한 화학적 특성을 갖고 있으며 펩타이드의 용해도는 서열과 변형에 따라 달라집니다. 모든 펩타이드를 녹이기 전에 용해도 테스트를 위해 소량의 펩타이드를 섭취하는 것이 좋습니다.
펩타이드를 용해시키는 것은 매우 중요한 단계입니다. 부적절한 용해로 인해 펩타이드가 손실되거나 실험이 실패할 수 있습니다. 펩타이드의 용해도는 주로 펩타이드의 서열에 따라 달라지므로 펩타이드를 디자인할 때 주의를 기울여야 합니다. 용해도를 높이려면 펩타이드 서열에 전하를 띤 잔기가 20% 포함되어야 하는 것이 좋습니다.
사용하기 전에 고객은 다음 세 가지 기본 원칙에 따라 펩타이드를 용해하는 데 적합한 용매를 선택할 수 있습니다.
첫째, 선택한 용매는 펩타이드를 완전히 용해할 수 있어야 합니다. 둘째, 선택한 용매는 실험 조건과 호환되어야 합니다. 마지막으로, 선택한 용매는 펩타이드와 반응하거나 펩타이드를 분해해서는 안 됩니다.
펩타이드의 양이 허용하는 한, 먼저 펩타이드의 작은 부분을 용해한 다음 전체 샘플을 용해시킬 수 있습니다. 용매로부터 펩타이드를 회수해야 하는 경우 동결건조 후 제거가 용이한 초기 용매를 선택하면 됩니다.
다음 제안 사항은 펩타이드를 용해하는 데 도움이 될 수 있습니다.
5개 미만의 아미노산을 함유한 펩타이드는 일반적으로 수용액에 용해되며, 소수성이 강한 아미노산(W, I, L, F, M, V, Y)은 예외입니다.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >친수성 펩타이드가 전하된 아미노산(E, D, K, R, H) 25% 함유<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% 하전된 아미노산은 물에 불용성이거나 부분적으로 용해될 수도 있습니다. 먼저 DMF, ACN, 이소프로필 알코올, 에탄올, 아세트산, 4-8 M GdnHCl, 요소 또는 DMSO(C, W, M 순서 아님) 및 기타 유사한 유기 용매와 같은 최소량의 강력한 유기 용매에 펩타이드를 용해시키는 것이 가장 좋습니다. 수용액에 펩타이드를 녹이는 유기용매를 한 방울씩 천천히 첨가하는 것이 가장 좋습니다. 용액이 탁해지면 용해도 한계에 도달했을 수 있으므로 계속 용해해도 소용이 없습니다. 처음에 선택한 용매는 실험 시스템과 호환되어야 한다는 점에 유의해야 합니다.
Hydrophobic amino acid content >75%강한 소수성 펩타이드는 일반적으로 수용액에도 불용성입니다. 이러한 펩타이드는 먼저 강한 유기 용매(예: TFA, 포름산)로 처리해야 용해되며 수용액에 첨가하면 침전될 수도 있습니다. 최종 펩타이드 용액은 변성시키기 위해 고농도의 유기 용매가 필요할 수 있으며, 유기 용매는 일반적으로 살아있는 세포의 생물학적 기능 연구에 사용되지 않습니다.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) 폴리펩티드 서열은 중복된 분자간 수소 결합 네트워크를 형성하는 경향이 있으며 농축된 수용액에서 쉽게 겔을 형성합니다. 이러한 펩타이드는 3단계에 설명된 대로 용해될 수 있습니다. 용해 중에 발생할 수 있는 문제를 줄이려면 고객이 펩타이드의 용해도를 향상시키기 위한 디자인과 순서에 더 주의를 기울이는 것이 좋습니다.